تکثیر، توالی یابی و کلون سازی ژن مولد آلفاآمیلاز باکتری باسیلوس در مخمر ساکارومایسس

در این پژوهش ژن کدکننده آلفا-آمیلاز باکتری باسیلوس سابتیلیس بومی با استفاده از روش pcr با پرایمرهای اختصاصی دارای جایگاه برش آنزیم های محدودگر noti و asci تکثیر شد و مورد توالی یابی قرارگرفت. توالی حاصل از pcr و وکتور شاتل-اپی زومال p316tdh3 با استفاده از آنزیم های محدودگر بریده و تحت عمل آنزیم لیگاز t4 به یکدیگر متصل شدند. وکتور نوترکیب حاصل وارد اشریشیاکلای شد. در مرحله بعد حضور ژن آلفا-آمیلاز در میزبان پروکاریوتی با روش colony-pcr مورد تایید قرار گرفت و وکتور استخراج شده از میزبان فوق با حضور پلی اتیلن گلایکول 3350 و ناقل dna به میزبان یوکاریوتی ساکارومایسس سرویزیه انتقال یافت. سویه مخمری نوترکیب به وسیله مارکر بیوسنتزی ura3 غربال شد و حضور ژن مورد بررسی قرار گرفت. در ادامه نتایج حاصل از توالی یابی ژن تکثیر شده آلفا-آمیلاز باسیلوس سابتیلیس بومی ترادف 1887 جفت بازی را نشان داد که در مقایسه با ترادف ژن سویه های استاندارد گزارش شده، 65/93% یکسانی را در سطح نوکلئوتیدی نشان می دهد. بر اساس شباهت موجود و سایر بررسی های بیوانفورماتیکی، ژن آلفا-آمیلاز مذکور می تواند در میزبان ساکارومایسس سرویزیه بیان گردد.